尊龙凯时为您提供优质的细胞培养解决方案，确保细胞以最佳状态生长和繁殖。以下是细胞培养的详细指南，旨在帮助用户更有效地进行细胞传代和冻存。

1. 培养条件

- 气相组成：95%空气 + 5%二氧化碳
- 培养温度：37℃

2. 传代方法

2.1 贴壁细胞传代步骤

1. 废弃培养基，使用无钙、镁的PBS轻轻洗涤细胞1-2次。
2. 在培养瓶中加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态；若大部分细胞呈圆形且开始脱落，立即将其轻轻吹打，然后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打以确保细胞完全脱落，转移至15ml离心管中，在1000rpm条件下离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例分瓶传代，将新培养基补充至5-8ml/瓶，放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中继续培养。

2.2 悬浮细胞传代步骤

进行半换液处理，将培养瓶竖立静置约1小时，轻轻吸掉3ml培养基，然后补充3ml完全培养基。若培养基颜色变化缓慢，可以直接添加500ul FBS。通常传代3次后，可以进行离心以去除死细胞。

3. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖瓶底80%时，弃去培养基，使用PBS洗涤细胞一次。
2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养基终止消化，将细胞悬液转移至15ml离心管，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml冻存液（如尊龙凯时的无血清冻存液），混匀后置于冻存管中。
4. 将冻存细胞放入-80℃冰箱中，存放24小时后再转入液氮罐中。

4. 细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管时需佩戴防护设备，快速置于37℃水浴中解冻，确保冻存管无结晶后，用75%酒精擦拭外壁。随后将细胞转移至含5ml完全培养基的离心管中，在1000rpm离心5分钟，弃去上清，用完全培养基重悬，并接种于T25培养瓶中，放入37℃、5%CO2培养箱中继续培养。

5. 注意事项

有些细胞在运输过程中可能因贴壁不牢而脱落，这是正常现象。如脱落较多，应将培养液收集至离心管，进行离心处理，重悬细胞后按1:2的比例进行分瓶传代。
尊龙凯时始终致力于为您提供最佳的细胞培养产品和专业服务，确保实验顺利进行。如需任何帮助，请随时联系我们。