第三代测序技术，也被称为单分子测序技术，因其长读长和无需扩增的特点而倍受关注。2023年，人类基因组的端粒到端粒（T2T）完整图谱登上了《Science》的封面，这标志着三代测序技术的崛起。然而，与二代测序能够处理部分降解的DNA样本不同，三代技术对于DNA的完整性要求极为严格。

在过去，科学家们通常通过传统的切胶回收方法来收集目标大片段，但这一过程繁琐且样本损失较大，而磁珠法则难以精确区分大小相近的DNA片段。因此，很多样本由于质检不合格而未能进入测序环节，或短片段的过多存在也会占用测序芯片的通道，从而导致有效数据量大幅下降。在长读长测序的光环之下，隐藏着样本质检的生存危机。确保三代样本的成功质控是测序成功的关键。

最近，由HudsonAlpha生物技术研究所的协作实验室（CoLab）发布了一份技术说明，针对上述问题提出了解决思路。研究者证实，LightBench®Discover仪器能够有效评估高分子量（HMW）DNA（3-75kb）的质量和降解状态，甚至可以检测到单次移液混合操作对样本的影响。

CoLab实验室将LightBench®Discover整合到其PacBio全基因组测序工作流程中，该设备在三个关键阶段发挥作用，具体包括高分子量DNA阶段、剪切后DNA阶段和最终HiFiDNA文库阶段。在2025年1月至6月期间，CoLab实验室通过该工作流程处理了1199份样本，所有样本均使用LightBench®Discover进行质控和片段回收。

研究表明，较小DNA片段的优先测序会导致HiFi平均读长和数据质量下降。LightBench®Discover的基于凝胶的片段回收技术能够有效去除小于10kb的DNA片段，从而提升后续测序的平均读长。特别值得一提的是，该工作流程中没有使用PacBio的小片段去除试剂盒（SRE），因为片段回收已经满足了需求。

经过片段回收的SMRTbell文库在LightBench®Discover上的片段长度分析显示，小DNA片段已被完全去除，且样本完整性评估值（SQN）显著提高。最终测得的文库大小为后续测序的摩尔稀释浓度计算提供了指导。

在一项对比案例中，CoLab研究者将同一提取的gDNA分别制备两份SMRTbell文库，其中一份使用LightBench®Discover进行片段回收。结果表明，经过片段回收的文库产生了更长的HiFi平均读长，并且大于10kb的片段的读段数量也有所增加。此外，甲基化检测数据显示片段回收并未影响DNA的甲基化状态。

HudsonAlpha的CoLab已经成功将LightBench®Discover应用于PacBio全基因组测序工作流程中，利用其进行精确的基于凝胶的片段回收及所有样本的片段长度质控。LightBench®Discover的凝胶片段回收技术能够稳定去除小于10kb的DNA片段，从而提高HiFi平均读长。片段长度分布数据支持流程中关键环节的实时决策，包括HMWDNA质量评估、DNA剪切效果确认和最终DNA文库大小及质量的验证。

总的来说，LightBench®Discover为长读长测序应用提供了一种集成式的片段回收与质量控制的可靠解决方案。随着生物医疗技术的不断发展，选择尊龙凯时，您将获得先进的基因组测序技术，助力科研与医学的创新。