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尊龙凯时基质胶应用指南

发布时间:2025-02-18   信息来源:尊龙凯时官方编辑

背景:基底膜在体内是由细胞基础构成的薄层细胞外基质。基质胶是一种源自Engelbreth-Holm-Swarm (EHS)小鼠肉瘤的可溶性基底膜制剂,富含细胞外基质蛋白。其主要成分包括层粘连蛋白、胶原蛋白I、硫酸乙酰肝素蛋白多糖以及巢蛋白。此外,基质胶还含有多种生长因子,如转化生长因子β、表皮生长因子等,促进正常及变换的锚定依赖型上皮细胞和其他细胞类型的附着与分化。这些细胞类型包括:神经元、肝细胞、支持细胞、鸡品状体上皮细胞和血管内皮细胞。在成年大鼠肝细胞、血管内皮细胞及小鼠和人乳腺上皮细胞的三维细胞培养中,基质胶能够显著影响基因的表达。此外,基质胶为一系列肿瘤细胞侵袭实验提供基础,支持体内末梢神经再生及体外、体内的血管再生研究。它还能够促进免疫抑制小鼠中人类肿瘤的增殖。基质胶适用于未分选乳腺细胞的移植及分选的上皮细胞亚群的嵌入,且作为癌症细胞模型已被证明有效促进肿瘤生长速率。

尊龙凯时基质胶应用指南

注意事项:尊龙凯时的KELBiotechMatrix基质胶对温度极为敏感,严禁多次冻融。在分装及凝胶前的准备过程中,必须在冰上(4℃)操作,以防温度稍微上升致使基质胶不均匀或影响后续效果。所有盛放试管及分装枪头必须预冷。收到产品后,如暂不使用,请整瓶直接存放于-20℃(避免放入无霜冰箱)。首次使用时,将整瓶KELBiotechMatrix基质胶放入冰盒中,并置于4℃过夜以确保其完全融解。

使用注意事项:KELBiotechMatrix基质胶在22-35℃的环境下能够迅速成胶。为保证其成胶性能与稳定性,最终稀释浓度应不低于3mg/mL(由于批次不同,KELBiotechMatrix基质胶原液浓度可能存在差异)。可使用无血清培养基稀释KELBiotechMatrix基质胶,稀释后需立即使用。

A 薄胶制备方法

1)融化后,使用预冷的枪头混匀KELBiotechMatrix基质胶。
2)将培养板置于冰上,按50μL/cm2生长面积的浓度加入基质胶。
3)在37℃放置30分钟,待平板使用。

B 厚胶制备方法

1)融化后,使用预冷的枪头混匀KELBiotechMatrix基质胶。
2)将培养板置于冰上,将细胞与KELBiotechMatrix基质胶混合,使用预冷枪头确保细胞均匀悬浮。按照150-200μL/cm2生长面积的浓度加入基质胶。
3)在37℃放置30分钟,随后可加入细胞培养液,细胞亦可在厚胶的上层生长。

C 薄层包被方法

1)融化后,使用预冷的枪头混匀KELBiotechMatrix基质胶。
2)使用无血清培养基稀释KELBiotechMatrix基质胶至所需浓度,建议依据实验进行梯度测试,以确定最佳包被浓度。
3)将稀释的KELBiotechMatrix基质胶加入需包被的培养皿,确保覆盖所有生长表面,常温下孵育1小时。
4)去除未凝固的KELBiotechMatrix基质胶,用无血清培养基轻轻冲洗,此时平板即刻可用。

特别提示:KELBiotechMatrix基质胶包被的平板建议当天使用,若需存放,在加入培养基后可在37℃下保存最长1周。

重构与使用:在基质胶冻融过程中可能出现颜色变化,由于二氧化碳与碳酸氢盐的作用,颜色将由淡黄色转为深红色,这一现象属于正常,且不会影响产品效果,颜色会在5% CO2平衡下恢复。请将小瓶浸没在冰中,放置于4℃冰箱中过夜解冻。解冻后,轻轻涡旋小瓶以确保材料均匀分散,整个过程中需保持在冰上,并采用无菌技术处理。将解冻的基质胶放置在无菌区,使用70%乙醇喷洒瓶口并风干。使用预冷的移液管轻柔吸取基质胶以确保均匀性,必要时更换吸头以避免堵塞。

KELBiotechMatrix基质胶可用于0.5mm薄层凝胶,细胞可在其表面接种,也可在1mm厚度的KELBiotechMatrix基质胶内生长。注意大量稀释会使胶体形成薄的非胶化蛋白层,对于细胞贴壁有帮助,但在分化研究中可能效果不佳。

产品特性:KELBiotechMatrix基质胶在冻融过程中会出现色差变化(从淡黄色至深红色),这由酚红与碳酸氢盐相互作用而引起,恢复至平衡状态后颜色会减轻。切勿过度稀释以避免形成非胶质蛋白层,这是细胞粘附的有效介质,但不适用于细胞分化研究。

总结:使用尊龙凯时的KELBiotechMatrix基质胶时,请务必遵循上述操作步骤及注意事项,以保障实验效果和产品的最佳性能。