尊龙凯时提供的SK-MEL-2人恶性黑色素瘤细胞培养说明书详细介绍了细胞的培养条件及操作步骤。

一、细胞培养条件

细胞名称：SK-MEL-2人恶性黑色素瘤细胞。生长特性：贴壁生长。冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）。培养体系为1640培养基加10%胎牛血清（FBS）和1%双抗。传代方法建议：首次传代比例为1:2，传代后每两天更换培养基。备注：用无菌离心管收集培养基以供对比。如对比培养效果不理想，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，培养至良好状态，灌满完全培养液并密封瓶口，以确保运输细胞的最佳状态。收到细胞后，使用75%酒精对细胞瓶进行消毒。随后在超净台内进行无菌操作，将细胞放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再进行后续处理。显微镜观察细胞生长情况，并拍照保存不同倍数的细胞图像，以供售后依据使用。（前三天的照片为重要证据，未提供照片默认为收到状态良好。）在将培养瓶放入培养箱时，请松开瓶盖，传代后建议分别用原有的完全培养基和自配的完全培养基进行对比培养。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞汇合度未超过80%时，将培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基在37℃、5% CO2培养箱中继续培养；当细胞密度超过80%时，可进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞状态，若细胞呈大部分圆形并已脱落，迅速取出，轻敲几下后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，于1000RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液以1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗一次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶约1ml，观察细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养基终止消化。轻轻吹打使细胞脱落，将悬液转移至15ml离心管中于1000RPM离心5分钟。
3. 去掉上清，沉淀细胞后加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中。如需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管，快速置入37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶，然后用75%酒精擦拭管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，于1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，使用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基以继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能由于贴壁不牢而发生脱落，这属于正常现象。可根据以下方法处理：将培养瓶中的培养液收集至离心管中，进行1000RPM离心5分钟，将上清收集作对比培养。随后，将沉淀细胞加入胰酶1-2ml，轻轻吹打重悬并消化1-2分钟，再加入5ml完全培养基终止反应。离心后，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬，并按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

• 细胞出现问题时，可重发的情况包括：细胞运输途中遭遇问题（如细胞丢失或瓶身破损）需重发；细胞污染问题需在收到48小时内提供真实实验结果经核实后重发；常温和干冰发货细胞如在24小时内未存活（需提供状态照片）可重发；如复苏后24小时内或常温发货4小时后未开封出现污染可重发；细胞活性问题需在7天内提供活力鉴定结果后重发；收到当天及第2、3天需拍照以作证明，未告知视为合格。
• 细胞出现问题时不予重发的情况包括：客户造成的细胞污染、操作不当引起的细胞状态不佳、非本库推荐培养体系所致的问题、未提供培养前三天照片的情况等。

如需详细了解或进行购买，请访问尊龙凯时官方网站。