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细胞培养技巧:尊龙凯时优化GM-CSF和IL-4诱导小鼠BMDCs的操作流程与常见问题解答

发布时间:2025-02-13   信息来源:尊龙凯时官方编辑

树突状细胞(Dendritic cells, DCs)在自然识别病原体及随后激活适应性免疫反应中扮演着至关重要的角色。尽管DCs在多种组织中广泛存在,但其在体内的含量非常有限,无法满足科学研究和临床治疗的需求。因此,研究人员探寻了多种方法以体外培养和扩增DCs。

细胞培养技巧:尊龙凯时优化GM-CSF和IL-4诱导小鼠BMDCs的操作流程与常见问题解答

在小鼠研究中,最常见的培养方法是从骨髓细胞诱导获得骨髓来源的DC(Bone Marrow-Derived Dendritic Cells, BMDCs)。此过程需要通过多种细胞因子,尤其是粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素-4(IL-4),对骨髓细胞进行体外诱导分化。BMDCs是研究免疫反应、抗原呈递和细胞免疫调控的重要工具。

上海交通大学药学院沈琦研究团队在《Advanced Functional Materials》期刊上发表了题为“Self-adjuvanting bacteria hydrogel for SHP1 checkpoint inhibition in tumor-draining lymph nodes to enhance cancer immunotherapy”的研究成果。该团队设计的AAM水凝胶系统结合了多种机制,旨在通过增强DCs的免疫活性来提升肿瘤免疫治疗的效果。在BMDCs诱导过程中,研究者使用了重组小鼠GM-CSF和小鼠IL-4。结果显示,MHV能通过甘露糖受体精准靶向BMDCs,并通过温和的光热效应引发肿瘤细胞的免疫原性细胞死亡(ICD),进而释放肿瘤抗原,激活BMDCs。

苏州大学FUNSOM的陈倩团队也在《Advanced Materials》上发表了题为“AMinimalist Pathogen-Like Sugar Nanovaccine for Enhanced Cancer Immunotherapy”的研究论文。在这项研究中,研究者使用重组小鼠GM-CSF和IL-4促进骨髓源细胞转化为BMDCs,并在体外验证了疫苗的免疫激活能力、免疫通路及抗原特异性T细胞的增殖情况。

为准备BMDCs,使用6-8周龄的C57BL/6小鼠和相关实验器具。在处理过程中,首先将健康的小鼠处死后,浸泡于75%乙醇中,以保证表面灭菌。然后取出股骨和胫骨,去除表面肌肉,开骨端以暴露髓腔,通过注射器提取骨髓细胞进行冲洗。收集的细胞悬液经过过滤和离心处理后,使用红细胞裂解液进行清洗,随后重悬于培养基中,诱导分化为BMDCs。

诱导BMDCs时,可以优化细胞密度和生长因子浓度,以提高诱导效率。成熟的DC可通过流式细胞术检测其表面标志物来确认,一般表现为CD11c、MHC-II和CD86等标志物的表达,同时可观察到典型的树突状突起。

在进行BMDCs的诱导后,为进一步提高其功能,可以通过刺激因子如LPS、TNF-α等进行免疫激活。这有助于提升树突状细胞的免疫功能,增加抗原呈递能力及细胞因子分泌。

在生物医学领域,无论是基础研究还是临床应用,强化对树突状细胞的认识和应用,显得尤为重要。随着技术的不断进步,像尊龙凯时这样的品牌,将在支持相关研究和产品开发中发挥日益重要的作用。通过持续的创新和研发,将进一步推动癌症免疫疗法的发展,为患者带来更多的治疗选择和希望。